接下来,研究人员评估α-1,2- MAN是否有助于ICCA启动细胞的特性。肿瘤干细胞(Cancer stem cells, CSCs)主要存在于低糖或营养储存的微环境中。在1-2代低糖条件下,异位表达FLAG标记的MAN1C1显著减少α-1,2- man +CD133+细胞的球形成。极限稀释分析被广泛应用于干细胞频率的测定。
通过体外有限稀释实验,研究人员发现MAN1C1过表达抑制了CD133+α-1,2- man +细胞的干细胞活性。MAN1C1的异位表达抑制了CD133+α-1,2- man +细胞的肿瘤启动能力,提高了肿瘤小鼠的存活率。总之,通过MAN1C1过表达抑制α-1,2- man修饰抑制了ICCA启动细胞的自我更新和肿瘤发生。
通过MAN1C1过表达抑制α-1,2- man可抑制ICCA启动细胞的肿瘤发生
FIP200是哺乳动物细胞自噬体形成所必需的。在营养剥夺或缺氧的情况下,自噬维持tic的自我更新。α-1,2-MAN对ICCA启动细胞自噬的作用。LC3-I向LC3-II的转化被用作自噬激活的指标。MAN1C1过表达显著降低CD133+α-1,2- man +细胞中LC3-II与LC3-I的比值。当自噬被激活时,绿色荧光蛋白连接LC3 (GFP-LC3)集中在自噬液泡中形成点状绿色荧光。MAN1C1的异位表达减少了GFP-LC3小点的形成。总的来说,MAN1C1减少了ICCA启动细胞的自噬。
α-1,2- MAN通过上调自噬基因FIP200增强ICCA启动细胞的自我更新和肿瘤发生能力
接下来,研究人员评估了FIP200在man1c1降低的自噬中的作用。FIP200的异位表达阻断了MAN1C1对CD133+α-1,2- man +细胞自噬的负性作用,MAN1C1过表达对CD133+α-1,2- man +细胞自我更新的抑制作用被FIP200过表达部分挽救。过表达FIP200可逆转MAN1C1对CD133+α 1,2- man +细胞的抑制作用。综上所述,α 1,2- man通过上调FIP200的表达来增强肝内胆管癌起始细胞的自我更新和成瘤能力。