浙江大学徐骁等团队合作发现肝细胞癌转移调控新机制

2月15日，浙江大学徐骁及Chen Ronggao共同在期刊《Advanced Science》上发表了题为“Integrated Multiomics Reveals Silencing of has_circ_0006646 Promotes TRIM21-Mediated NCL Ubiquitination to Inhibit Hepatocellular Carcinoma Metastasis”的研究论文，该研究使用多组学方法描绘circRNA和RBP的调控网络。Has_circ_0006646（circ0006646）是一种未报道的HCC circRNA，与预后不良相关，circ0006646沉默能够明显抑制体内转移。总体而言，该研究描述了circRNA介导的NCL泛素化降解在HCC转移中的综合多组学景观，并提供了一个新的治疗靶点。

研究背景

肝细胞癌(HCC)占大多数原发性肝癌(75 - 85%)，是第六大常诊断的癌症，并已被公认为全球癌症相关死亡的第三大原因。尽管在过去的70年里，化疗、靶向药物、免疫治疗以及手术切除和肝移植(LT)等全身疗法发展迅速，但HCC的5年生存率仍然不容乐观。

转移和复发，或治疗抵抗的后果共同决定了致命的HCC结果。转移作为肿瘤细胞在全身的扩散和增殖，被证实是直接影响实体肿瘤患者5年生存率的主要因素，其范围为5 ~ 30%。微血管浸润(MVI)被认为是转移的起始阶段，它的存在会影响手术的有效性。因此，作为转移的初始步骤，破译MVI发生的分子机制尤为关键。

研究进展

为了验证circ0006646对转移能力的影响，研究人员首先测量了circ0006646在HCC细胞系和人正常肝细胞系(THLE-2)中的表达水平。与正常细胞系(THLE-2)相比，在HCC细胞系中观察到circ0006646的表达显著增加。研究人员设计了两个sirna覆盖circ0006646的后接位点。转染两种sirna后，circ0006646的表达被沉默，而PTK2的表达未被沉默，这意味着sirna精确地靶向circ0006646而不是其亲本基因。

此外，上皮-间充质转化(epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)是上皮细胞向间充质表型的转化，是转移过程中经典的变化之一。在本研究中，当circ0006646被沉默时，被认为是EMT标志物的E cadherin和vimentin的表达水平分别升高和降低。这些变化随后通过免疫组织化学(IHC)染色和免疫荧光(IF)测定证实。综上所述，circ0006646沉默抑制HCC的侵袭和迁移。

另外，研究人员还构建了HCC PDX模型。通过侵袭实验，研究人员发现circ0006646沉默也能抑制原发性HCC细胞的转移能力。此外，NCL、p53、E cadherin的蛋白水平变化与HCC细胞系的结果一致。在应用PDX模型证实circ0006646是HCC患者的潜在治疗靶点后，研究人员模拟临床全身治疗，将sh-circ0006646或shNC慢病毒(两次注射，间隔一周)注射到小鼠尾静脉，在小鼠脾脏注射荧光素酶标记的HCCLM3细胞。注射sh-circ0006646慢病毒可降低体内HCC细胞的转移能力，通过降低荧光强度、减少转移和缩小肿瘤面积来测量。总之，circ0006646是一个具有临床转化价值的治疗靶点。

Circ0006646可能是治疗肝癌转移的潜在靶点

研究结论

综上所述，本研究描述了circrna介导的NCL泛素化降解在HCC转移中的综合多组学景观。Circ0006646是一种在肝细胞癌中表达上调的新RNA，可通过抑制K48泛素化稳定表达NCL促进肝细胞癌转移。P53通路在这一介导EMT发生的生物学过程中发挥了重要作用。