中山大学/南华大学合作发文：乳腺癌的潜在治疗靶点

11月5日，中山大学/南华大学研究团队共同在期刊《Advanced Science》上发表了题为“TBL2 Promotes Tumorigenesis via PRMT5/WDR77-Mediated AKT Activation in Breast Cancer”的研究论文，本研究中，研究人员利用实时PCR、蛋白质免疫印迹实验和免疫组织化学对BC患者样本中的TBL2表达进行了分析，还采用Kaplan-Meier生存分析评估其预后意义。研究人员采用蛋白质组学分析、免疫沉淀试验和蛋白质免疫印迹法研究TBL2对AKT磷酸化激活的影响。研究结果显示，BC中存在TBL2的特异性高表达，与多种临床病理特征显著相关，并与患者的不良生存结局相关。通过体内和体外实验观察到，TBL2抑制可抑制BC细胞增殖，而TBL2过表达则有相反的效果。机制上，TBL2被确定为一种支架蛋白，可促进PRMT5和WDR77之间的相互作用。这种相互作用增强了PRMT5的甲基转移酶活性，导致AKT磷酸化激活增加并促进乳腺癌细胞增殖。总之，这项研究揭示了TBL2在PRMT5激活AKT过程中的新功能，并提出TBL2作为治疗BC的潜在治疗靶点。

背景信息

乳腺癌仍然是全球重大的健康问题，在许多地区其发病率和死亡率都较高。尽管在治疗开发方面取得了进展，但发现新的生物学标志物和治疗靶点对于推进个性化和有效的乳腺癌管理至关重要。

蛋白激酶B（PKB）是PI3K/AKT/mTOR信号通路中细胞生长和分化的关键调节因子。AKT的异常调节已被证实与包括乳腺癌、卵巢上皮癌、前列腺癌和胃癌在内的多种人类癌症有关。AKT激活通过多个步骤紧密控制，其中PI3K介导的PIP2转化为PIP3是主要机制，随后由PDK1磷酸化Thr308位点，由mTORC2磷酸化Ser473位点。此外，已发现翻译后修饰（PTM），如甲基化和糖基化，可调节AKT激活。近期的研究强调了PRMT5（II型蛋白质赖氨酸甲基转移酶）及WDR77在介导AKT甲基化、磷酸化和激活方面的重要作用，从而促进与肿瘤生长和进展相关的各种过程。

TBL2是WD40重复蛋白家族的成员，参与调节细胞内信号通路，包括TGF、PERK和PI3K-AKT信号通路。新兴的研究表明，TBL2作为驱动基因，增强内质网应激并促进肺腺癌细胞的增殖。异常的TBL2调节与威廉姆斯-比尤伦综合征、血脂异常和膀胱癌等疾病有关，但在BC中的研究仍很有限。此外，TBL2的确切分子功能尚不清楚，因此需要进一步的研究来全面阐明其在BC中的潜在作用，并作为治疗靶点。

高水平的TBL2表达预示着不良的预后

研究人员收集并分析了200例侵袭性导管癌患者在中山大学肿瘤防治中心的随访临床数据和病理标本。研究人员进行了TBL2表达的IHC分析，发现94.5%的样本在细胞质中呈阳性，核周有明显的染色。此外，TBL2在BC组织中的表达明显高于相邻的正常组织。TBL2表达水平与临床病理分期的相关性分析显示，高TBL2表达组患者的T分期较晚（P=0.024），肿瘤局部复发率（定义为胸壁或区域淋巴结或远处复发）较高（P<0.001）。Log-rank生存分析表明，低TBL2表达患者的RFS（复发-自由生存期，定义为从手术到首次复发的时间间隔）较长（P=0.003），OS（总生存期，定义为从诊断到任何原因死亡的时间）较长（P=0.023），而高TBL2表达患者则相反。此外，多元比例风险回归模型显示TBL2表达是影响RFS（P=0.041）和OS（P=0.012）的独立影响因素。根据Kaplan-Meier Plotter在线数据库，所有TBL2表达较高的BC患者的RFS和OS都较短。这些结果表明TBL2可能加速BC的恶性进展。

高水平的TBL2表达预示着不良的预后

TBL2促进乳腺癌细胞增殖

研究人员研究了TBL2在乳腺癌进展中的作用。研究人员用两种人类乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231进行了遗传改造，以过表达或沉默TBL2。在乳腺癌细胞中过表达TBL2增加了细胞增殖、克隆形成、脱离培养基的生长和细胞周期转换，而TBL2缺失则产生了相反的效果。此外，为了进一步研究TBL2敲低对细胞生长的影响，研究人员对MDA-MB-231细胞进行了梯度转染TBL2siRNA并使用CCK8法进行检测。研究人员观察到，转染100nM siRNA的细胞表现出较弱的生长能力，与仅转染30nM的细胞相比具有统计学差异。在小鼠来源的乳腺癌细胞系4T1中也观察到了类似的结果，这表明TBL2在促进乳腺癌进展中发挥着保守的作用。然而，TBL2并不显著影响乳腺癌细胞的侵袭和转移。

在体内研究中，研究人员使用原位小鼠乳腺癌模型进一步验证了TBL2对细胞增殖的促癌作用。TBL2过表达组的肿瘤生长显著加快，而TBL2沉默组的肿瘤生长受到抑制。为了确认TBL2对增殖的影响，研究人员使用4T1细胞建立了乳腺癌原位小鼠模型。研究人员将表达TBL2的荧光素酶表达的4T1细胞（2×105）经乳腺脂肪垫原位注射。生物发光成像（Bioluminescence imaging）显示，TBL2过表达组的肿瘤负荷较高，而TBL2沉默组的肿瘤负荷较低。此外，TBL2过表达组肿瘤中Ki-67的高表达表明细胞增殖增加。这些结果表明TBL2在促进乳腺癌进展中发挥着关键作用。

结论

综上，本研究发现TBL2通过增加PRMT5甲基转移酶活性来促进BC细胞增殖。这反过来又增强了AKT的磷酸化并激活下游级联信号通路。本研究结果和结论有助于更好地理解BC细胞增殖的紊乱，并为开发靶向这一疾病的新型干预措施提供了潜在的靶点。