世界一个CRISPR基因编辑临床试验数据公布

基因编辑领域又迎来了一个重磅消息：昨日，四川大学华西医院卢铀教授团队发布了世界一个CRISPR基因编辑临床试验的数据——证实使用CRISPR-Cas9编辑的T细胞在临床上治疗晚期肺癌等疾病，是安全可行的。

他们在期刊《自然·医学》报道了由CRISPR–Cas9 PD-1编辑的T细胞在晚期非小细胞肺癌患者中进行的首次人类I期临床试验的结果（ClinicalTrials.gov NCT02793856）。论文题为“Safety and feasibility of CRISPR-edited T cells in patients with refractory non-small-cell lung cancer”。

研究人员们得出结论，CRISPR–Cas9基因编辑的T细胞的临床应用通常是安全可行的。未来的试验应使用优异的基因编辑方法来提高治疗效果。

聚集有规律地间隔的CRISPR–Cas9编辑免疫检查点基因，可以提高T细胞疗法的疗效，但首要的任务是了解这种操作的安全性和可行性，其次才是其功效，探索性目标则包括跟踪编辑的T细胞。

这个试验可以追溯到2016年6月——当时，卢铀教授团队发起了世界一个CRISPR疗法人体试验，却对CRISPR-Cas9在临床应用中的安全性仍存在诸多疑虑。

而如今，CRISPR–Cas9基因编辑技术和癌症免疫疗法都获得了巨大的飞跃。用于阻断PD-1/PD-L1通路的PD-1抑制剂，吸引了卢铀教授团队目光。能否破坏T细胞的PD-1，然后将T细胞回输给患者，从而实现晚期肺癌的治疗？

于是，该团队开始在久治无效的晚期肺癌患者身上展开了临床研究，他们在经过多种疗法后不见成效，并加入了这项研究成为志愿者。，共有22例患者纳入研究。

在试验过程中，研究团队使用Cas9和单向导RNA质粒的电穿孔，通过共转染离体生产PD-1编辑的T细胞，从而破坏PD-1基因的2号外显子。

图1：示意图显示了患者流程和研究设计，包括患者入组、计划的剂量组、干预、随访和结果评估。

试验中，有5名患者因T细胞体外扩增不足，没有接受治疗，余下的17名患者均获得了高活性（90%）的编辑后的T细胞。在回输编辑过的T细胞之前，有2人疾病进展，1人肺部感染，1人类风湿关节炎加重，1人主动退出研究。有12人接受了T细胞的回输治疗。

这12人在28天的周期内，分三次注射PD-1被编辑过的T细胞，每位患者每次回输T细胞的中位数是1.33亿个。

从整体效果来看，基因编辑的效率在8.7%-31.2%之间，中值是20.1%。在编辑过的T细胞中，PD-1的表达水平明显降低，PD-1的破坏率在33.7%-67%之间，中值是46.3%。

图2：T细胞中CRISPR–Cas9介导的PD-1基因编辑

所有与治疗相关的不良事件均为1/2级，这些不良事件包括淋巴细胞减少症（3例）、疲劳（3例）、白细胞减少症（2例）、发烧（2例）、关节痛（2例）和皮疹（2例）。输注后在外周血中可检测到编辑过的T细胞。中位无进展生存期为7.7周（95％置信区间为6.9-8.5周），中位总生存期为42.6周（95％置信区间为10.3-74.9周）。通过下一代测序，在18个候选位点，脱靶事件的中位突变频率为0.05％（范围为0-0.25％）。

扩展数据图2：与治疗相关的不良事件及其持续时间。

他们的T细胞中位编辑效率是5.81%。与未被编辑的T细胞相比，在被编辑过的T细胞中，CD8和IFN-γ双阳性的占比显著增加。这表明，破坏T细胞的PD-1之后，T细胞的活性增强了。而另一方面，中位脱靶率的结果为0.05%，远远低于1.69%的中靶率——研究人员因此得出关于CRISPR-Cas9编辑T细胞这一操作安全性方面的结论。

图3：NGS和WGS进行的脱靶情况分析

截至2020年1月31日，所有患者出现疾病进展。在12名患者中，有11名（91.7％）死于肿瘤进展，所有患者的死亡均与治疗无关。剩下的1名患者仍在接受其他治疗。

可以共享的任何数据和材料将通过材料转让协议发布。支持该研究结果的所有其他数据将在可能的情况下由合理的要求由相应的作者提供。

该研究报告的原始测序数据已保存在中国科学院北京基因组研究所BIG数据中心的人类基因组序列档案库（http://bigd.big.ac.cn/gsa-human/）中。